Агар для теста на ДНКазу с толуидиновым синим, М1041-500г

Агар рекомендуют для определения дезоксирибонуклеазной активности у бактерий и грибов, в первую очередь у клинических штаммов стафилококков.

Состав**:

Ингредиенты	М482 грамм/литр	М1041 грамм/литр
Гидролизат казеина	15,00	–
Папаиновый перевар соевой муки	5,00	–
Триптоза	–	20,00
Дезоксирибонуклеиновая кислота (ДНК)	2,00	2,00
Натрия хлорид	5,00	5,00
Толуидиновый синий	–	0,10
Агар-агар	15,00	15,00
Конечное значение рН (при 25°С) 7,3 ± 0,2

** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам

Приготовление:

Размешать 42,0 г порошка М482 или 42,1 г порошка М1041 в 1000 мл дистиллированной воды. Подогреть с частым помешиванием для полного растворения частиц. Стерилизовать автоклавированием при 0,9-1,1 атм (118-121°С) в течение 15 мин. Остудить до 45°С и разлить в чашки Петри. Перед стерилизацией к агару М482 добавить 0,1 г толуидинового синего (FD051) или (при необходимости) залить чашку после инкубирования 0,1%-ным раствором толуидинового синего (FD051).

Принцип и оценка результата:

Эту среду рекомендуют для определения дезоксирибонуклеазной активности у бактерий и грибов, в первую очередь для идентификации клинических штаммов стафилококков. При добавлении толуидинового синего среду используют для дифференциации непигментированных вариантов серраций клинического происхождения от клебсиелл и энтеробактеров. Weckman и Catlin (1) наблюдали ДНКазную активность у микрококков и отметили наличие корреляции между положительной реакцией на ДНКазу и коагулазной активностью, что было подтверждено другими исследователями (2). Для активации ДНКазной активности в состав среды были введены ДНК и хлорид кальция. Модификацию с введением толуидинового синего предложил Schreier (3). На модифицированной среде можно быстро идентифицировать Serratia marcescens и дифференцировать серрации от других энтеробактерий.

Гидролизат казеина, папаиновый перевар соевой муки и триптоза служат источником питательных веществ. В результате деполимеризации ДНК под действием ДНКазы после внесения на поверхность инкубированной среды раствора соляной кислоты вокруг колоний образуется прозрачная зона, а остальная часть среды мутнеет (4). Далее, если вносится толуидиновый синий, ввиду метахромазии, свойственной этому красителю, зона активности становится ярко-розовой. Следует отметить, что краситель может подавлять рост некоторых штаммов стафилококков. Для точной идентификации рекомендуется проведение дополнительных тестов.

Контроль качества:

Внешний вид порошка:

Гомогенный сыпучий светло-желтый (М482) или голубой (М1041) порошок.

Плотность готовой среды:

Образуется среда, соответствующая по плотности 1,5%-ному агаровому гелю.

Цвет и прозрачность готовой среды:

Готовая среда имеет янтарную (М482) или голубую (М1041) окраску, прозрачна или слегка опалесцирует, если в чашках Петри формируется гель.

Кислотность среды:

При 25°С водный раствор (4,2% вес/об) имеет рН 7,3 ± 0,2.

Культуральные свойства:

Ростовые характеристики референс-штаммов через 18-24 ч при 35-37°С.

Штаммы микроорганизмов (АТСС)	Рост	ДНКаза
Staphylococcus aureus (25923)	Обильный	+
Staphylococcus epidermidis (12228)	Обильный	–
Streptococcus pyogenes (19615)	Обильный	+
Serratia marcescens (8100)	Обильный	+

Примечание: "+" - изменение цвета среды вокруг колоний с голубого на лилово-розовый (при использовании толуидинового синего)