Набор для окраски по Граму

Метод был предложен датским ученым Г.К.Грамом, который разработал его в 1882 и опубликовал в 1884 году, как способ, позволяющий дифференцировать сходные по симптомам бактериальные инфекции: Streptococcus pneumoniae (пневмококк) и Klebsiella pneumoniae

Назначение набора для окраски по Граму

Набор для окраски по Граму предназначен для дифференциальной окраски, исследования структуры клеточной стенки и выявления принадлежности бактерий к грамположительным или к грамотрицательным группам.

Набор для окраски по Граму рассчитан на проведение 500 анализов.

Принцип метода окраски по Граму

Принцип метода окраски по Граму основан на разнице в химическом составе клеточной стенки прокариотических микроорганизмов. Грамположительные микроорганизмы способны удерживать комплекс красителей триметилфенолового ряда с йодом, в то время как грамотрицательные микроорганизмы, имеющие другую химическую структуру клеточной стенки, не обладают способностью удерживать комплекс красителей триметилфенолового ряда с йодом.

Состав набора для окраски по Граму

• Карболовый раствор генциана фиолетового, 25 мл - 1 фл.
• Раствор Люголя, 25 мл - 1 фл.
• Водный раствор фуксина Циля, 2,5 мл - 1 фл.
• Инструкция по применению набора для окраски по Граму - 1 шт.

Приготовление набора для окраски по Граму

Основной фуксин Циля разводят в 10 раз дистиллированной водой перед использованием. Для этого к содержимому флакона с надписью "Основной фуксин Циля" добавляют 22,5 мл дистиллированной воды.

Использование набора для окраски по Граму

Предметное стекло перед исследованием обезжиривают и делают на нем мазки исследуемых культур. Мазки следует делать тонкими, чтобы клетки равномерно распределялись на поверхности стекла и не образовывали скоплений. Препарат высушивают на воздухе, фиксируют над пламенем горелки (спиртовки) и выполняют следующие действия:

• на мазок кладут полоску фильтровальной бумаги;
• наносят 2-3 капли из капельницы (50-75 мкл) карболового раствора генциана фиолетового (входит в состав набора для окраски по Граму);
• выдерживают в течение 2 мин;
• удаляют фильтровальную бумагу;
• наносят 2-3 капли из капельницы (50-75 мкл) раствора Люголя (входит в состав набора для окраски по Граму);
• выдерживают в течение 1 мин;
• сливают остатки красителя и раствора Люголя;
• обесцвечивают в течение 30-45 сек 96-градусным этиловым спиртом;
• промывают водой;
• наносят 2-3 капли из капельницы (50-75 мкл) водного раствора фуксина (входит в состав набора для окраски по Граму);
• выдерживают в течение 2 мин;
• сливают краситель;
• промывают препарат водой;
• высушивают на воздухе;
• микроскопируют с иммерсионной системой.

Учет и интерпретация результатов, полученных на базе набора для окраски по Граму

При правильном окрашивании грамположительные бактерии имеют сине-фиолетовый цвет, а грамотрицательные - розово-красный.

Условия хранения и транспортировки набора для окраски по Граму

• Растворы набора для окраски по Граму хранить плотно закрытыми.
• Срок годности набора для окраски по Граму - 1 год.